菌种保藏方法(微生物菌种保藏方法概述)

一、段落保存方法

有些微生物经过冷冻或干燥处理后会很快死亡，所以在这种情况下，只能求助于传代培养和保存。传代培养就是定期转移菌种，培养，然后保存。是最基本的微生物保藏方法，比如酸奶等常用生产菌种的保藏。继代培养时，培养基的浓度不能太高，营养成分不能太丰富，特别是碳水化合物的浓度要尽可能降低。培养温度通常略低于最佳生长温度。如果是产酸菌株，则应在培养基中添加少量碳酸钙。

一般大多数菌种的保存温度为5℃，而厌氧菌、霍乱弧菌和部分病原真菌等微生物菌种可在37℃保存，蘑菇等大型食用菌菌种可直接在室温下保存。虽然传代培养保存方法简单，但其缺点也是显而易见的，如:

①应变管的棉塞经常容易发霉；

②菌株的遗传性状容易发生变异；

③反复传代后菌株的致病性、形成生理活性物质的能力和形成孢子的能力下降。

④需要定期补种，工作量大；

⑤杂菌污染机会较多。

二、液体石蜡覆盖保存法

与以前的方法相比，这种方法可以保存更长时间的菌株，适用于霉菌、酵母菌、放线菌和需氧菌的保存。这种方法可以通过限制供氧来防止干燥和削弱微生物代谢。该方法简单方便，也适用于不适合冷冻干燥的微生物(如产孢能力低的丝状菌)的保存，而一些细菌，如固氮菌、乳酸杆菌、明串珠菌、分枝杆菌、螺旋菌、沙门氏菌，以及一些真菌，如曲霉属、Phanerochaete、毛霉属、根霉属等不适合用该方法保存。

三、载体保存方法

也就是说，微生物被吸附在合适的载体上用于干燥和保存。常用的方法包括以下几种，如:

①土壤保存法:主要用于能形成孢子或孢囊的微生物菌种的保存。方法是在灭菌的土壤中加入菌液，立即在室温下干燥或细菌繁殖后再干燥，然后在室温下冷藏或密封。保存的土壤原则上应为肥沃的耕作土壤，土壤应风干、粉碎、过筛、灭菌。微生物在土壤中繁殖后的干燥保存方法是:取适量土壤(5g)，置于带棉塞的试管中，加水或充分稀释的液体培养基(含水量应为土壤最大持水量的60%)，然后高压灭菌。然后，大量接种待保存的微生物，培养至肉眼可确认菌丝，移入干燥器，短时间干燥或风干，密封，冷藏或室温保存。

②砂的保存方法:取干净的砂，过筛除去大砂粒，用磁铁吸去砂中的铁屑，然后用NaOH溶液、10%HCl溶液和水交替洗涤数次。干燥后放入试管或安瓿管中，保持2 ~ 3 cm深度。干热灭菌后，加入1mL菌种培养液，充分混合后，放入real 空干燥器中。也可以将两个水洗砂(用HCl预处理)与一个贫瘠、过筛的黄土混合，灭菌，然后保存菌种。

③硅胶保存法:用6 ~ 16目无色硅胶代替沙子，干热灭菌，然后加入菌液。在添加菌液时，往往会因硅胶的吸附热而使温度升高，所以需要设法冷却。

④磁珠保存法:将菌液浸泡在素烧磁珠(或多孔玻璃珠)中，然后干燥保存的方法。将1/2管硅胶(或无水CaSO4)放入螺旋口腔试管中，铺上玻璃棉，再放入10 ~ 20个磁珠，干热灭菌后，插入菌悬液，最后冷藏，室温保存或减压干燥，密封保存。这种方法对酵母非常有效，尤其是对根瘤菌，可以保存两年半。

⑤麸皮的保存方法:在麸皮中加入60%的水，灭菌，接种培养，最后干燥保存。

⑥纸(滤纸)的保存:将灭菌纸浸入培养液或菌悬液中，常压或减压干燥，保存在装有干燥剂的容器中。

四。悬浮保存法

即使微生物悬浮在适当的溶液中。常用的方法有:

①蒸馏水保存法:适用于霉菌、酵母菌和大部分放线菌。这种细菌可以悬浮在蒸馏水中，在室温下储存几年。这个规律要注意避免水分的蒸发。

②糖液保存法:适用于酵母，如将其菌悬于10%蔗糖溶液中，然后置于阴凉避光处保存，最长可达10年。此外，还可以用缓冲溶液、盐水等保存。

动词 （verb的缩写）宿主保存方法

即微生物侵入宿主后的保存方法。用于目前不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次体、螺旋体等。，必须在活体动物、昆虫和鸡胚中感染和传代。这种方法相当于一般微生物的传代培养和保存方法。病毒微生物也可用其他方法保存，如液氮保存、冻干保存等。

不及物动词低温贮藏

适用于抗冻性强的微生物。这些微生物可以冷冻在细胞外而不被破坏，而对于大多数其他微生物来说，冷冻在细胞外或细胞内都会对细胞造成破坏。采用这种保存方法时，应注意以下几点:

①选择适合冷冻干燥的菌龄细胞。

②要选择合适的培养基，因为某些微生物的抗冻性往往随着培养基成分的变化而表现出很大的差异。

③选择合适的菌液浓度，菌液浓度越高，存活率越高，保质期越长。

④最好不要添加电解质(如盐等。)到细菌溶液中。

⑤可以在菌液中加入甘油等保护剂，防止冷冻过程中细菌大量死亡的现象。同样，也可以加入各种糖、去纤维血、脱脂乳等保护效果好的溶剂，但对于某些微生物，不加保护剂更有效。

⑥原则上应尽快进行冷冻处理，但加入保护剂时，可允许静置一段时间后再进行处理。

⑦就动物细胞而言，应在-20℃范围内以1℃/min左右的速度缓慢降温，然后必须尽快降至保存温度；对于绝大多数微生物来说，这是不必要的。比如结构复杂的原虫，可以在-35℃范围内缓慢冷却，而噬菌体必须用上述两步法冷冻。

⑧长期存放，存放温度越低越好。

⑨使用冷冻菌种时，应采取快速融化措施，即在35 ~ 40℃的温水中轻轻摇动，使其迅速融化。就厌氧菌而言，应选择静置和融化的措施。当冷冻的细菌融化后，应尽可能避免再次冷冻，否则细菌的存活率会明显下降。

常用的冷冻保存方法包括:

①低温冰箱保存(-20℃、-50℃或-85℃):

冷冻保存时使用螺旋口腔试管比较方便，也可以用塑料薄膜包裹棉塞试管。保存时，菌液量不宜过多，可加入一些保护剂。此外，还可以用直径为5 mm的玻璃珠吸附菌液，然后将玻璃珠放入塑料容器中，然后保存在低温冰箱中。

②干冰保存(-70℃左右):

即把应变管插入干冰中，然后放入冰箱冷冻保存；

③液氮保存(-196℃):

这是最适用的微生物保存方法。

操作步骤如下:

A.装瓶:用尽可能浓的菌悬于含有适当防冻剂的灭菌溶液中(霉菌保存不需要防冻剂)，将此溶液0.2 ~ 1 ml分装于安瓿中，或直接接种于装有分散剂的安瓿中，或直接将菌丝体琼脂块悬浮于分散剂中。

b、熔封瓶:如果直接存放在气态液氮(-150℃ ~-170℃)中，不需要熔封。

C.用熔融法检查安瓿管是否密封良好:即将熔融的安瓿管浸泡在4℃的适当颜料溶液中2 ~ 30分钟，观察颜料是否进入安瓿。

d、缓冷:将密封的瓶管放入小广口瓶中，然后用液氮以1℃/min左右的速度冷却至-25℃左右，或放入-20℃ ~-25℃的冰箱中缓慢冷却30 ~ 60 min。

e、快速冷却:最后浸泡在液氮中，快速冷却至-196℃。

七、冻干保存法

原理是先冷冻微生物，然后减压升华除水。实际上，细菌体内的水分被去除大部分后，细胞的生理活动就会停止，因此可以达到长期维持生命状态的目的。这种方法适用于大多数微生物菌株(包括噬菌体和立克次体)的保存。冻干时，应注意以下问题:

A.冻干前的培养条件:首先检查菌种纯度。一般来说，将待保存的微生物培养在营养丰富、易于增加的培养基上为宜；菌龄应达到对数生长期；如果是有孢子或孢子的微生物，孢子和孢子形成后最好保存；细菌的浓度要尽可能的高，比如细菌要达到109 ~ 109~1010个/mL。

B.菌株编号等的标记。:可以标在安瓿外面，也可以密封在安瓿里。

C.安瓿的制备:将安瓿用2%HCl浸泡过夜，用自来水冲洗三次，用蒸馏水刷洗，晾干，塞紧，贴上标签，60℃恒温干燥。

D.添加保护剂:常用的保护剂有脱脂乳、12%蔗糖、含7.5%葡萄糖的普通肉汤、含7.5%葡萄糖的血清等。甘油保存法:在5mL菌种保存管中，将同体积的菌种悬液与40%甘油充分混合后，置于-20℃冰箱中保存。

八、甘油管保存方法

在5ml菌种保存管中，将同体积的菌种悬液和40%甘油充分混合，然后保存在-20℃的冰箱中。

北京百欧博威生物科技有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统、超低温冰箱、生物安全柜等仪器设备，可开展微生物分离鉴定的常规分子实验研究。积极满足我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求，为社会乃至国外提供微生物菌种资源的收集和保藏。在确保生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、健康卫生、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、遗传资源、信息资源和专业技术服务。

此外，我们还为需要菌株、细胞、培养基和辅助试剂等产品的人提供优质服务。我们提供采购物品的前期信息，中期合同中保证，从后期货物的跟踪到最终售后，确保物品准确到位。相关人员会对其进行维护，确保您在中国微生物菌种查询网得到最好的服务！正因为如此，北京百欧博威生物科技有限公司与国内外众多科研院所、生物制药、第三方检测机构、科研院所、化工企业有着良好、长期、稳定的合作关系！

收集0条评论。