血细胞计数器(自动血细胞计数器)

看下降的详细解释！

01清洁实验环境

在层流安全柜内彻底喷洒消毒剂，并用纸巾擦拭。将用过的纸巾放入合适的垃圾桶。

将70%乙醇喷入安全柜，用纸巾擦拭。安全柜现在干净了，可以使用了。

细胞悬浮液的处理

从冰箱中取出细胞培养基和胰蛋白酶，放入37℃的二氧化碳培养箱中加热。

用显微镜观察待计数的细胞，检查是否有可见的细菌和真菌污染迹象。

用70%乙醇喷洒培养基瓶和移液管，并将其放入安全柜中。

轻轻摇动培养瓶，确保悬浮细胞充分混合。

悬浮细胞沉淀前，取0.5 ml细胞悬液样品，保存在无菌微量离心管中。

去除粘附细胞上残留的培养基。

室温下用DPBS溶液洗涤，加入EDTA胰蛋白酶分离细胞(S液和蛋白酶用量见DPB表格)。

放入37℃的二氧化碳培养箱中2~5分钟。(培养时间取决于细胞类型)。

取出在倒置显微镜下观察。发现细胞突起回缩，细胞间隙增大，细胞从培养瓶底部分离成单细胞。

所有细胞分离后，在含10%胎牛血清的培养基中于37℃中和EDTA胰蛋白酶(剂量见表)。

上下摇动细胞悬液三次，使细胞复活，然后转移到15毫升试管中。

在室温下，细胞悬浮液以每分钟1000转的速度离心5分钟。

离心后，丢弃细胞悬浮液。

然后，将细胞颗粒悬浮在含有10%胎牛血清的37℃培养基中至原始培养体积。

用5 ml无菌移液管取0.5 ml细胞悬液样品，转移至无菌微量离心管。

03准备血细胞计数器

如果使用玻璃血细胞计数器和盖玻片，请在使用前用酒精清洗。用水浸湿盖玻片，并将盖玻片固定在血细胞计数器上。如果盖玻片下出现牛顿折射环，则表明盖玻片已正确附着。

如果使用一次性血细胞计数器(如INCYTO DHC-N01)，使用前只需从包装中取出即可。

04开始计数。

将100升细胞放入新的微量离心管中，加入400升0.4%台盼蓝(最终浓度0.08%)，轻轻混合。

小心地将一滴悬浮液滴入计数室的孔中，这样细胞悬浮液就可以通过毛细作用被吸入。

用倒置显微镜，聚焦在10x物镜下血细胞计数器的4*4网格线上。计算未染色的活细胞。

计数时，只计算框中或右边界和下边界的单元格。

同样，如果需要，可以对台盼蓝染色的死亡细胞进行计数，以估计活细胞的比例。

将血细胞计数器移到下一组方块(16)并继续计数，直到所有四组方块(每组16个)都已计数完毕。

05计算活细胞的数量。

计算每组方块(16)中细胞计数的平均值，并记录它们的值以计算细胞浓度。

取4组16个正方形的活细胞平均数，乘以10000，得到每毫升细胞数。

当加入台盼蓝时，乘以5以校正1:5的稀释度。最终值是原始细胞悬液中活细胞的数量/毫升。示例:

如果每16个方格的细胞计数为50、40、45和52，则平均细胞计数为:

(50 + 40 + 45 +52) 4 = 46.75

46.75 x 10000 (104) = 467500

467500×5 = 2337500个活细胞/毫升

06计算小区活动信息资源的网络功率。

将活细胞数和死细胞数相加，得到总细胞数。

通过细胞计数除以总细胞计数来计算活性百分比。

示例:

细胞计数:2337500细胞/毫升

死亡细胞数:50000细胞/毫升

237500+50000 = 2387500个单元格

237500 2387500 = 97.9%活力

-结束-