之前的文章中，我们说到如果在养细胞的过程中，如何判断细胞是否被细菌、真菌感染，以及如何祛除细菌污染。

　　今天我们来讨论一下，细胞培养过程中的，更难处理的支原体污染。

　　三、支原体污染

　　支原体概述：

　　支原体（mycoplasma）是一类没有细胞壁、高度多形性、能通过滤菌器、可用人工培养基培养增殖的最小原核细胞型微生物，大小为0.1——0.3微米。由于能形成丝状与分枝形状，故称为支原体。

　　在细胞培养过程中，显微镜很难捕捉到它们的身影，与细胞竞争营养，影响细胞生长，最终导致实验出现偏差。

　　支原体污染症状：

　　细胞培养总结一下：

　　支原体污染鉴定：

　　推荐使用稳定可靠的支原体检测试剂盒，这里以经典法试剂盒：VenorGem qEP（货号：11-9025/11-9100/11-9250）为例：

　　1、样品制备：

　　①浓缩：当细胞长至90%时，即可收集上清开始检测，可对样品进行适当浓缩。

　　注：浓缩仅适用于支原体的完整性，避免浓缩前支原体被破坏（如热灭活）。

　　②稳定：细胞培养样品可能含有丰富的DNA酶，在低温下也能降解支原体DNA。因而推荐进行样品稳定化处理。如果立即进行DNA抽提，则忽略这一步。

　　③DNA 抽提：大量证据表明，DNA抽提可实现最高的灵敏度。DNA抽提有多种方法，但应适合支原体基因组。

　　我们推荐：

　　VenorGeM Sample Preparation kits （货号56-1010/-1050/-1200) 适合手动DNA抽提。

　　这些DNA抽提试剂盒已经过大量验证，具体流程参见试剂盒说明书。另外VenorGeM qEP kit包含的内控DNA对照，也用于验证DNA抽提步骤（内控原理：已知浓度的细胞，包含内部控制DNA序列，该序列不和现有的任何有机体序列同源，对检测的DNA样品干扰极小。在DNA提取前，将该内控细胞和样品一起加入细胞裂解液中，被一起提取出来。和靶点样品一起进行荧光定量PCR实验，内控DNA序列的成功扩增提示靶点DNA的提取成功）。