立即将0.2 mol/L HCI倒入危险性废物容器，然后用去离子水将凝胶冲洗几次。由于脱嘌呤作用依靠H在凝胶中的扩散，琼脂糖中不同含量的DNA会发生不同效率和程度的脱嘌呤作用。

　　因此，硝酸纤维素膜该反应很难控制和重复。如果脱嘌呤反应过强，会产生DNA过度片段化，并且降低杂交信号的强度。当目的片段小于15kb时，最好不要进行脱嘌呤处理。然而，我们建议采用脱嘌呤/缺口方法，即使这对于高分子质量DNA的Southern分析并不是必须步骤。

　　问题(步骤9):硝酸纤维素膜没有均匀的湿润。

　　解决方案：如果膜在水中浸泡数分钟后仍不能完全浸湿，必须更换一张新膜，因为将DNA转移到一张未均匀浸湿的膜上是不可靠的。最初的膜应被丢弃或者夹在2XSSC饱和的3MM滤纸之间高压5min。

　　这种处理通常会使膜完全浸湿。高压后的膜可以夹在高压过的2X ssC饱和浸润3MM滤纸中间，密封于塑料袋中4'C保存，用时取出。

　　以下所列为制备标准Southern分析所需的基因组DNA限制性内切核酸酶消化产物时，需要记住的要点：

　　●消化的DNA量必须足以产生信号。对于哺乳类动物基因组DNA的Southerm分析，当用于检验单拷贝序列的探针为标准长度(> 500bp)并具有高比活度(> 109cpm/ug)时，凝胶每一加样孔应加10ug DNA样品。如果样品中目的序列的浓度较高，可以按比例减少DNA用量。