如何理解液相色谱图(液相色谱图)

对于每一个走过上百根柱子的实验者来说，液相色谱就是打开未知物质世界的大门。科学研究中的许多问题都可以从色谱图中得到很好的反映。一些问题可以通过改变设备参数来解决，而另一些问题必须通过修改操作程序来解决。毕竟，色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键。

妹子整理总结了一些你在实践中可能会经常遇到的图集问题。让我们看一看。

01拖尾峰值

1.筛板堵塞:如果色谱柱两端的过滤筛板堵塞，样品会被堵塞在筛板处，造成时间延迟，导致样品流出色谱柱后出现峰尾。有必要反冲洗色谱柱或更换筛板。

2.崩柱:是指由于其他原因使色谱柱的柱效丧失，不能保留物质，使物质不残留在固定相上，随流动相流出，但仍有一点柱效，导致拖尾。色谱柱需要重新填充或更换。

3.污染:即样本不在同一起跑线上起跑，而是稍微晚一点从后面跑到终点，出现了尾巴。更换色谱柱或用有机溶剂梯度洗脱1h以上以洗柱。

4.流动相PH值选择错误:如果在一定PH值下，部分样品中分子型和离子型存在动态平衡，则离子型向分子型的过渡会出现拖尾。调节PH值可以抑制分子解离，改善拖尾现象。对于碱性化合物，相对较低的PH值更有利于获得对称的峰。

02前沿峰

1.样品过载:保留的样品在正常的出峰时间之前陆续出来，形成前沿峰。减少样本内容。

2.样品溶剂选择不当:当样品溶剂的洗脱能力远大于流动相时，会出现前峰。例如，在反相色谱中，己腈被用作样品溶剂，但流动相的洗脱能力较弱。选择流动相或接近流动相的比例作为样品溶剂。

3.色谱柱损坏:色谱柱的柱效丧失，物质无法保留。更换转向柱。

4.大峰前面有一个小峰，有一个伪前峰，就是大峰前面没有单独的小峰埋着。调整流动相的洗脱梯度。

03倒峰

1.样品折光率低:折光率检测器测得的信号是折光率，峰反转的原因是组分的折光率低于流动相的折光率。

2.密度的原因:密度不同导致峰值不同。

3.由进样引起:进样过程中，样品瞬间阻断了原来的流动相，然后瞬间流动，产生先降后升的“溶剂峰”。

4.基本不可避免:尽量使用与流动相相同的溶剂作为样品溶解溶剂，进样前注意平衡和冲洗参比池。高峰回落基本不可避免，但这个操作会小一些。

04包装

1.色谱柱问题:色谱柱丢失，色谱柱被污染。

2.样品溶解性差:温度可能会影响溶解性。

3.流动相不均匀:一般流动相匹配不好，管道内流动相不均匀也会导致上述现象。

05基线漂移

1.柱温波动:即使很小的温度变化也会引起基线的波动，通常会影响差分检测器、电导检测器、灵敏度较低的紫外检测器或其他光电检测器。使用柱温箱，控制柱和流动相的温度，在检测器前使用热交换器。

2.流动相不均匀:流动相条件变化引起的基线漂移大于温度引起的漂移。使用HPLC级溶剂，并在使用前对流动相进行脱气。

3.流动池被污染或有气体:用甲醇或其他强极性溶剂清洗流动池。如有必要，可使用1N硝酸(代替盐酸)。

4.流量匹配比或流量变化不当:改变匹配比或流量。为避免此问题，请定期检查流动相的组成和流速。

5.样品中有很强的保留物质:它们被洗脱为馒头峰样品，从而显示出逐渐上升的基线。使用保护柱，如有必要，在进样之间或分析过程中定期用强溶剂清洗色谱柱。

06，一个宽阔的山峰出现了。

1.色谱柱污染或故障会减少塔盘数量:更换相同类型的色谱柱。如果新色谱柱可以提供对称的色谱峰，用强溶剂清洗旧色谱柱。

2.色谱柱和检测器之间的管线过长或管线内径过大:更换内径较小的短管线。

3.检测器对反应时间或流通池体积的过度响应:缩短响应时间或使用较小的流通池。

07基线噪音

1.流动相、检测器或泵中有空气体(尖峰):流动相脱气，冲洗系统以去除检测器或泵中的空气体。

2.漏液:检查管接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐沉淀，有无异响。如有必要，更换泵密封件。

3.流动相混合不完全:用手摇动混合均匀或使用低粘度溶剂。

4.温度影响(柱温过高，检测器不加热):使用柱温箱降低温差或增加热交换器。

5.同一线路上有其他电子设备(偶然噪声):断开LC、检波器、记录仪，检查干扰是否来自外部，并进行纠正。采用精密稳压电源。

08分离是不够的。

1.流动相梯度洗脱设置不合理:优化梯度洗脱程序。

2.流动相污染或变质(导致保留时间改变):重新配置流动相。

3.保护柱或分析柱堵塞:取下分析用保护柱，必要时更换；如果分析柱堵塞，可以反冲洗；如果问题仍然存在，色谱柱可能会被强烈保留的污染物损坏，建议使用适当的再生程序；如果问题仍然存在，入口可能被堵塞，更换入口筛板或更换色谱柱。