多肽修饰(磷酸化合成肽的修饰技术)固相合成磷酸化肽有两种方法:

(1)预制磷酸化组分，然后在肽链载体上组装成(积木法)；

(2)肽链载体的整体磷酸化。

在磷酸化Tyr、Thr和Ser的最初制备中，磷酸的二甲酯、苄酯和叔丁酯的形式常被用于参与这三种AA的酰化。

磷酸化合成肽的修饰-肽特异性生物

为了避免液相预制操作中大麻信息资源的烦扰，含有Ser、Thr或Tyr的肽树脂可以在与上述类似的条件下直接酰化:

磷酸化合成肽的修饰-肽特异性生物

不含烷基酯的Fmoc-Tyr[PO3H2]-OH也可用作在肽树脂上缩合的组分。该方法对于制备短链磷酸肽是可行的。对于长肽，缩合的产率会受到影响。特别是，当肽链中的两个磷酸邻苯二甲酸酯残基彼此相邻时，脱水可能导致产生焦磷酸型副产物的问题。此外，当待磷酸化的残基是Ser时，因为-Ser [PO3H2]-I的空间位阻小，当Fmoc的氨基上基团被除去时，它在Ser上被消除，产生脱氢丙氨酸残基(Dha)，同时除去磷酰基。来避免以上的烦恼。很多实验室提出单苄酯的成分Fmoc-AA-[PO( OBzl) OH]-OH是最理想的。最近的研究发现，单苄酯是磷酸化的。

组分与固体氨基组分的最佳缩合条件是:

Fmoc-AA-[PO( OBzl) OH]-OH/HBTU(或TBTU)/Hobt/Diea (1: 1: 1: 2)磷酰基结构中的单苄酯与王树脂相同，即95%的/H2O/1~2h。

有研究表明，肽链在载体上组装后进行固相磷酸化似乎更实用，因为它可以在同一合成中结合Boc和Fmoc，产物中可以存在两种形式的磷酸化残基和游离侧链Ser和Thr(图1)，为构效关系研究提供了丰富的样品资源。

磷酸化合成肽的修饰-肽特异性生物

(图1)组装肽链和磷酸化后固相磷酸肽的合成

在图1的合成中，三个带有羟基侧链的残基，Tyr8、Thr6和Ser4，被依次组装在中。根据设计要求。Ser6是磷酸化的位点，Thr4和Tyr8保护侧链自由基。因此，从一开始，Ser4就没有受到任何侧链的保护，因此它可以与其他两个残基区别对待。