质粒图谱(一分钟教你读懂质粒图谱！)

质粒图谱是质粒DNA序列的物理图谱，提供了包括质粒大小、筛选标记、克隆位点、转录和翻译元件等信息。，为我们选择质粒，了解它们的特性和应用提供了重要的依据。新手怎么看质粒图谱？今天，我们来解释如何阅读质粒图谱。底部有一个关于质粒和酶切点选择的相关教学视频。

质粒的成分是什么？

复制启动站点:Ori是控制复制启动的站点。原核生物的DNA分子中只有一个复制起点。真核DNA分子有多个复制起始位点。

抗生素耐药基因:可轻易检测到，如Amp+、Kan+。

多克隆位点MCS:克隆携带外源基因片段。

P/E启动子/增强子

术语终止信号

加入poly(A)信号:可以稳定mRNA。

如何阅读质粒图谱

第一步:首先看Ori的位置，知道质粒的类型(原核/真核/穿梭质粒)。

第二步:看筛选标记，比如抗性，决定用什么筛选标记。

Ampr水解-内酰胺环以减轻氨苄青霉素的毒性。

Tetr可以阻止四环素进入细胞。

Camr生成氯霉素羟乙酰基信息资源的网络衍生物，使其失去毒性。

Neor(kanr)氨基糖苷磷酸转移酶使G418(那加霉素的衍生物)失活。

Hygr使潮霉素失活。

第三步:看看多克隆位点(MCS)。

它有多个限制酶的单一切割点。促进外源基因的插入。如果在这些位点外插入外源基因，会使一些标记基因失活，便于筛选。决定要不要放目标基因，怎么放。

第四步:看外源DNA的插入大小。

通常，质粒只能容纳小于10 Kb的外源DNA片段。一般来说，外源DNA片段越长，插入越困难，越不稳定，转化效率越低。

第五步:是否含有表达系统元件，即启动子-核糖体结合位点-克隆位点-转录终止信号。

这用于区分克隆载体和表达载体。通过添加一些与表达调控相关的元件，克隆载体成为表达载体。载体的选择应基于实验目的。

启动子-核糖体结合位点-克隆位点-转录终止信号

启动子-促进DNA转录的DNA序列。这个DNA区域往往位于基因或操纵子编码序列的上游，是DNA分子能够特异性结合RNApol并启动转录的位点，但启动子本身并不转录。

增强子/沉默子——是真核生物基因组(包括真核生物病毒基因组)中的一种，具有增强邻近基因转录过程的调控顺序。其功能与增强子的位置或方向无关。即它可以在被调控基因的上游或下游发挥作用。/沉默子-负增强子，负调控序列。

核糖体结合位点/起始码/SD序列(RBS/Agu/SDS): mRNA对于核糖体有两个结合位点，对于原核生物是AUG(起始码)和SD序列。

转录序列(终止子)/翻译末端终止密码子:在结构基因的最后一个外显子有一个保守的AATAAA序列，在这个下游有一个GT或T富集区，共同构成poly(A)尾信号。在基因的最后一个外显子，有一个保守的AATAAA序列，下游有一个GT或T富集区，共同构成poly(A)尾信号。

步骤6:质粒图谱上的箭头。

有些箭头是顺时针，有些箭头是逆时针，实际上代表的是两条DNA链，即质粒是环状双链DNA，它的启动子在一条链上，它的抗性基因在另一条链上。