1测试材料
(1)以天津黄瓜研究所育成的一代黄瓜杂交种金燕3号的开花植株为试验材料。
(2)主要试剂为15%蔗糖溶液和100毫克/千克硼酸溶液。
(3)主要仪器有电子显微镜、双凹面载玻片、培养皿、镊子、干燥器、冰箱、分析天平。
(4)溶液的制备用15毫克蔗糖和+0.1毫克硼酸制备100毫升培养基。
2种测试方法
(1)花粉收集:早上采摘黄瓜盛开的雄花,取出花药放入烘干机中3 ~ 4小时,然后取出,用镊子将花粉散开,挑出杂质。
(2)花粉贮藏:将获得的花粉分成两部分,在不同条件下贮藏。
(1)一般在室温下保存,并在室温下将一个花粉保存在指管中。
(2)低温贮藏。把另一个花粉放在手指管里,储存在冰箱里。温度控制在4℃左右。
(3)花粉萌发本实验采用液体培养基:15%蔗糖+100mg/kg硼酸。将培养基用高压灭菌器灭菌20min,然后将3-4滴培养液滴入无菌室的双凹玻璃滑槽中,用毛笔蘸取少量花粉,均匀撒在培养液表面(注意不要搅拌,以免花粉混入液体中,因空气不足而影响萌发,花粉深浅不同,光折射难以在显微镜下观察)。处理后,在相同温度下培养2 ~ 3h,记录发芽率,比较发芽能力。
一天之内,随着时间的推移,温度和花龄发生变化,即温度由低变高再变低,花龄由幼变强再变老。从图1可以看出,采花当天花粉萌发有两个高峰期,即上午16: 00左右和下午16:00左右。中午,由于温度高,花粉萌发会受到阻碍。因此,人工授粉后,将载玻片放入底部有少量蒸馏水的培养皿中(注意不要让水通过载玻片),盖上培养皿,放入室内2 ~ 3小时,在10×10倍电子显微镜下检查三个不重叠的场。花粉管长度超过花粉直径的花粉被认为是萌发的花粉。统计花粉总数和发芽花粉数,然后计算花粉发芽率。
(4)花粉耐贮性从采集花粉的当天起,每天采集花粉进行培养,并调查其发芽率。
二、结果与分析
1贮藏温度和时间对花粉萌发率的影响采花当天,花粉应分别在8: 00、12: 00和16: 00均匀撒在培养基上,不要在上午6-10和下午16: 00,应避免中午高温。
2采花后花粉生活力的变化
然后,研究人员观察了每天早上8点花粉生活的变化规律。从表1中可以看出,随着时间的推移,花粉的发芽率和伸长量都在下降,这也表明储存的花粉应尽早使用。
3不同贮藏条件和贮藏天数对黄瓜花粉萌发的影响从采花当天到每天8: 00,将花粉在不同温度下培养相同时间,观察并比较萌发率。
结果表明,黄瓜花粉在采花当天萌发率最高。随着贮藏天数的增加,发芽率逐渐降低,并在第2天保持高活力。然而,室温贮藏花粉的萌发率在第3天显著下降,低温贮藏花粉的萌发率在第3天比第2天略有下降。黄瓜花粉的寿命很短,但在低温冰箱中储存时,花粉粒的发芽能力会持续很长时间。因此,为了在授粉过程中有足够的生命力强的花粉,可以在授粉的当天早上将雄花拾起,直接用于授粉。如果亲本开花时间不太好,因为开花前一天花粉粒已经成熟发芽,吐黄的雄花芽可以在开花前一天下午采摘,在18 ~ 20℃密封保存在塑料袋或纸袋中。根据1961年关于贮藏温度和湿度对黄瓜开花后花粉萌发的影响的研究,黄瓜花粉在10℃和较高湿度下贮藏可长期保持萌发能力。
三.讨论和总结
1.黄瓜花粉在15%蔗糖+100mg/kg硼酸的液体培养基上萌发能力较高。然而,为了防止花粉粒在萌发过程中破裂,应在培养基的制备中加入少量Ca2+进行保护。因此,液体培养基适合黄瓜花粉萌发。
一般来说,黄瓜花粉的寿命很短,开花后的花粉在低温贮藏时可以长时间保持活力。因此,人工授粉应在开花后及时进行,选择合适的授粉时间。
要想建立一套完整的适合黄瓜花粉萌发条件和生活力持续时间的实验,必须要有合适的实验方法,用这种方法研究生理生化和遗传的基础理论,这也有利于培育和稳定新的杂种类型,也可以结合诱变育种,加速育种进程。本实验将黄瓜花粉在不同温度下贮藏,在室温下培养,测定其发芽率,这是黄瓜生殖生长期的实验之一。育种工作中的一些问题已经解决。与遗传背景和其他生长期相关的实验需要在此方法的基础上进行讨论。
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